在使用超微量核酸蛋白測(cè)定儀的過(guò)程中我們?nèi)菀讓?duì)它造成什么誤區(qū)
1、雙光束、高精度、多色器光學(xué)檢測(cè)系統(tǒng),像差校正光柵和二極管陣列檢測(cè)器提供可靠的檢測(cè)結(jié)果
2、檢測(cè)光程固定,儀器內(nèi)部沒(méi)有移動(dòng)的光學(xué)部件,檢測(cè)光程為10mm。
3、采用超長(zhǎng)壽命的氙閃燈,開(kāi)機(jī)后無(wú)需預(yù)熱即可工作
4、可選配5.7英寸彩色觸摸控制器進(jìn)行單機(jī)操作,也可連接電腦操作
超微量核酸蛋白測(cè)定儀應(yīng)用:
用于生命科學(xué)領(lǐng)域的核酸蛋白定量分析,如進(jìn)行DNA、RNA、蛋白質(zhì)、細(xì)胞等樣品的紫外/可見(jiàn)光檢測(cè)。
數(shù)據(jù)多種導(dǎo)出格式(EXCEL、PPT等)方便保存和數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。
超微量核酸蛋白測(cè)定儀注意事項(xiàng):
1、偵測(cè)后立即使用拭鏡紙擦拭臺(tái)面。先取一張將上下臺(tái)面的液體吸走,再吸過(guò)樣品的面反折到內(nèi)部,折迭四次后以單方向多次擦拭臺(tái)面(DNA擦5次,Protein擦20次)。
2、同一滴液體只能做一次偵測(cè),欲重復(fù)定量同一樣品,請(qǐng)擦掉前一滴,重新取出一滴進(jìn)行偵測(cè)。
3、基本上核酸樣品可使用1~2ul做測(cè)量,隨各液體體積特性之不同會(huì)有不同體積需求,原則上不超過(guò)2ul。并請(qǐng)使用2ul避免體積不足導(dǎo)致液柱無(wú)法完整形成。唯蛋白質(zhì)樣品因呈色劑與蛋白質(zhì)本身特性,務(wù)必使用2ul進(jìn)行偵測(cè)。
4、當(dāng)軟件跳出錯(cuò)誤訊息時(shí),請(qǐng)?jiān)敿?xì)閱讀并依指示進(jìn)行障礙排除。常發(fā)生的情形是在偵測(cè)過(guò)程液柱并未正確形成,軟件會(huì)出現(xiàn)以下訊息。可先用肉眼觀察液柱是否未完整連接上下臺(tái)面,或樣品內(nèi)有泡泡,將上臂拉起后,擦掉該滴樣品,再重新進(jìn)行偵測(cè),必要時(shí)可將樣品體積加大至2ul。
5、不可使用含有HydrofluoricAcid(HF)之樣品,其它無(wú)腐蝕性之液體皆可使用。
超微量核酸蛋白測(cè)定儀的使用誤區(qū):
1)測(cè)量核酸時(shí)發(fā)現(xiàn)結(jié)果不準(zhǔn):首先要確定核酸樣品的純度,如果是DNA樣品,260/280比值應(yīng)該在1.6-2.0之間。比值小于1.6說(shuō)明有蛋白類(lèi)物質(zhì)的干擾,大于2.0說(shuō)明有RNA的干擾。如果是RNA樣品,260/280應(yīng)該大于2.0,如果值偏高如2.5以上,可能是RNA降解的原因,如果小于2.0說(shuō)明有蛋白類(lèi)物質(zhì)的干擾。我們還可以通過(guò)230nm、和320nm處的吸收峰來(lái)判斷樣品的純度,230表示存在以下污染物如:碳水化合物、多肽、苯酚等,核酸和蛋白在320nm處的吸收峰幾乎為零,所以如果有吸收說(shuō)明有雜質(zhì),可能是稠環(huán)芳香有機(jī)試劑的污染。
2)適合測(cè)量純度高的蛋白樣品,不能測(cè)量含有雜質(zhì)的蛋白樣品:通過(guò)上面的公式我們能夠發(fā)現(xiàn),c值是與吸光度A成正比的,如果樣品中含有雜質(zhì)成分,且雜質(zhì)在280處有吸收峰的話(huà)就會(huì)造成測(cè)量值不準(zhǔn),一般我們提蛋白過(guò)程中使用的有機(jī)試劑如果殘留的話(huà)就會(huì)造成測(cè)量蛋白值不準(zhǔn)的情況。
3)測(cè)量?jī)蓚€(gè)樣品中間務(wù)必要用吸水的面巾紙和蒸餾水清潔測(cè)量臂:如果不做清潔,殘留的樣品會(huì)對(duì)后來(lái)樣品的測(cè)量造成影響。切記不要用擦鏡紙擦拭,因?yàn)椴羚R紙不吸水。
4)測(cè)量同一個(gè)樣品的時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng):因?yàn)樯蠘恿亢苌伲S著時(shí)間的推遲樣品會(huì)有所蒸發(fā),造成測(cè)量出來(lái)的濃度有誤差。
5)如果測(cè)量值不是很準(zhǔn),建議可以把樣品稀釋到適當(dāng)濃度再進(jìn)行測(cè)量。
6)如果感覺(jué)機(jī)器的平衡性不好,可以通過(guò)以下方法檢測(cè):以空氣為blank,反復(fù)測(cè)量空氣,兩次測(cè)量之間間隔5秒,測(cè)出的吸光度值應(yīng)該小于0.04,說(shuō)明平衡性良好。