濾光系統(tǒng)
全波長多功能酶標儀簡單的是用濾光方式來劃分。一般來說,可以分為濾光片型和光柵型兩大類。也有一些全波長多功能酶標儀里面同時裝上了濾光片和光柵。但是濾片和光柵并不能同時完成同一個檢測,本質上還只是把濾片和光柵放在了一起,并沒有使兩者糅合而產生新的技術突破。
光柵型濾光系統(tǒng)具有使用方便,可以進行光譜掃描,靈活性等優(yōu)點。當然,濾光片系統(tǒng)也有其顯著的優(yōu)勢,例如價格較為便宜,檢測靈敏度高,帶寬的可選擇性,可以進行快速的濾光片切換,可配備有自動加樣系統(tǒng),在化學發(fā)光檢測中光線的透過率高。
目前,濾光片系統(tǒng)應用更廣,因為它可以讓實驗者完成更多的試驗。
測定波長
一般全波長多功能酶標儀的測定波長在400~750nm或800nm之間,*可以滿足ELISA的顯色測定。目前國內常見的ELISA試劑盒所使用的標記用酶均為辣根過氧化物酶(HRP),底物通常為四甲基聯苯胺(TMB)和鄰苯二胺(OPD),其在過氧化氫溶液的存在下,經HRP作用,分別氧化為2,2,—二氨基偶氮苯(DAB)和聯苯醌。當pH值為5.0左右時,DAB在450nm波長處有大吸收,當pH值降為L 0時,大吸收波長移至492 nm,同時摩爾消光系數變大,顯色加深,因而常用強酸如硫酸或鹽酸終止反應。TMB的氧化產物聯苯醌在波長450nm處有大消光系數,如果HRP量少,H:O:和TMB過量時,則形成藍色的陽離子根。降低pH,即可使藍色的陽離子根轉變?yōu)辄S色的聯苯醌,使用硫酸作為終止劑可使產物穩(wěn)定90min。因此,450nm和492 nm兩個波長是目前ELISA測定常用的。各種酶標儀都配有放置濾光片的可自動轉換的部件,可以同時安裝6~8片濾光片,所配備的濾光片均應包括上述兩個波長,有的酶標儀以490nm濾光片替代492nm濾光片,影響不大。除了這兩個基本濾光片外,考慮到雙波長比色的需要,還應有620nm或630nm或650nm和405nm波長的濾光片,其他濾光片可根據自己的需要選擇。有時,有的實驗室希望用酶標儀作微量生化測定,故全波長多功能酶標儀生產廠家對其生產的酶標儀擴展了紫外檢測功能,此時需要一個340 nm波長濾光片。此時,酶標儀的測定波長范圍就成為340—750nm或800nm。